Le proteine svolgono reazioni biochimiche complesse e devono possedere una speciale struttura spaziale tridimensionale quando si eseguono funzioni microbiche . dopo la generazione microbica, le proteine stesse subiscono anche complessi processi fisiologici {3}. E l'urea sono i reagenti sperimentali più comunemente usati nella denaturazione delle proteine . Quindi, quali sono le differenze tra i due? Come scegliere nell'esperimento?
A causa dell'efficacia dei fattori esterni, la conformazione di molecole di proteine naturali pure subisce cambiamenti anormali, con conseguente perdita di attività biologica e cambiamenti anormali nelle loro proprietà fisiche e chimiche . Questo tipo di situazione è chiamata denaturazione proteica . la trasduzione può coinvolgere la rottura e la rottura di bond e non Leghi peptidici sulla struttura primaria .
Le proteine transgender di cloridrato di guanidina e urea contengono due sistemi: il primo sistema è la fusione preferenziale delle proteine transgender con guanidina cloridrato e urea, producendo ossido nitrico sintasi . quando l'ossido nitrico sintasi viene rimosso, riflette uno spostamento in equilibrio, accompagnato da un aumento della concentrazione dennaturante della concentrazione {1 In condizioni naturali pure continuano a cambiare in ossido nitrico sintasi, portando alla fine a un transgender proteico completo; Il secondo sistema è l'effetto di solubilizzazione del cloridrato di guanidina e dell'urea sui residui di aminoacidi idrofobici . a causa della capacità di guanidina idrocloruro e urea di formare legami covalenti, i legami covalenti di guanidina idrocloruro e urea devono essere spezzati in alta concentrazione ({3}} {) Risultato, la guanidina cloridrato e l'urea diventano buoni solventi organici per residui non polari, causando i residui idrofobici all'interno della struttura molecolare proteica per flettere e aumentare la solubilità, portando a diversi livelli di denaturazione proteica .
La differenza tra i due nella conversione delle proteine:
Valore di concentrazione: a temperatura interno, 3-2 mol/L guanidina cloridrato può causare le proteine sferiche a cambiare dal loro stato naturale al centro del loro stato di trasformazione . in generale, aumentando il valore di concentrazione dell'agente denaturante può migliorare il livello di trasformazione. L'idrocloruro ha una maggiore capacità di denaturazione dell'urea a causa delle sue proprietà cationiche . Alcune proteine sferiche non possono essere completamente trasformate anche in una soluzione di 8 mol/L di urea, non consapevoli che esistono generalmente in una soluzione irregolare arrotolata (completamente trasformata) in una soluzione di 8 mol/L guanochloruro {7} {7}
Solubility: The solubility of urea is slower and weaker than that of guanidine hydrochloride, with a solubility of 70%~90%. When urea has a longer efficacy time or higher temperature, it cracks to produce cyanate, which decorates the hydroxyl groups of asset recombinant proteins through covalent bonds. However, it has the advantages of not being weak in elettroliti, neutralizzazione e basso costo; La guanidina cloridrato ha una solubilità di oltre il 95% e un effetto di fusione rapido senza causare decorazione covalente del legame delle proteine ricombinanti di attività ., tuttavia, ha svantaggi come un costo più elevato, facile accontentarsi di standard acidi e alcalini e potenziale impatto sugli esperimenti post hoc.
Complessivamente, poiché i reagenti sperimentali comuni nei processi di denaturazione delle proteine, i vantaggi e gli svantaggi della guanidina cloridrato e dell'urea sono i seguenti: la guanidina idrocloruro ha una solubilità e una trasferibilità relativamente forti, rendendo meno in grado di aumentare la decorazione di legami covali delle proteine ricombinanti . sull'analisi della cromatografia a scambio di proteine; L'urea ha una solubilità relativamente scarsa, ma ha vantaggi come non essere un elettrolita debole, essendo neutro, a basso costo e non causando facilmente che molte proteine si accontentino dopo il ripiegamento di proteine . in esperimenti specifici, i ricercatori scientifici devono selezionare in base agli standard e agli obiettivi per ottenere i migliori risultati sperimentali .